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正文

从尿液中获取单一STR分型实验浅谈论文发表中易降解生物检材DNA检验的方法与趋势

【摘  要】易降解生物检材在法医dna检验中很常见。在刑事案件中,以嫌疑人所留的微量生物检材中提取脱落细胞中DNA来认定嫌疑人是否在现场出现具有重要作用,但有时嫌疑人的特殊生物检材:如尿液,粪便等,由于易降解、酸碱度、包含杂质等原因,常规检验方法很难检出,那么如何通过创新的提取手段和方法,做出嫌疑人完整单一的STR分型就成了解决问题的关键。
本文从尿液的检验方法出发,对检材的检验现状和研究进展进行了分析,并就处理对策和注意事项进行了总结,期望为疑难易降解生物检材的鉴定工作提供有益参考。 【关键词】易降解生物检材;法医鉴定;论文发表DNA
 ABSTRACT:   Biodegradable biomaterials are very common in forensic DNA testing. In criminal cases, it is very important to extract DNA from exfoliated cells from the trace biological samples left by suspects to determine whether the suspects are present on the scene. However, sometimes the special biological samples of suspects, such as urine and feces, are difficult to be detected by conventional test methods due to their easy degradation, pH and impurities, etc The key to solve the problem is to make a complete and single STR typing of suspects.
In this paper, from the urine test methods, the current situation and research progress of the test materials were analyzed, and the treatment countermeasures and precautions were summarized. It is expected to provide useful reference for the identification of difficult and easily degradable biological samples.
KEY WORDS: biodegradable biomaterials; forensic identification; DNA
在当前dna检验中,PCR-str复合扩增技术是常用的方法。但是,随着犯罪分子作案手段的不断高明,在检材中,往往涉及面罩、绳索、混合精斑、尿液、大便等疑难生物检材。如何对这些疑难生物检材进行法医学检验,对于案件的侦破具有重要意义。从目前的法医实践来看,疑难生物检材可以分为超微量检材、降解生物检材和混合生物检材。本文从尿液这种人体体液的检材对目前的有关研究现状进行评述与总结。
从尿液中获取单一STR分型实验浅谈论文发表中易降解生物检材DNA检验的方法与趋势_论文发表
1 案件资料
2018年某月某日,吉林省四平市梨树县梨树镇某村李某家被盗,现场丢失现金和金银首饰共价值人民币2万余元。技术人员在对案发现场进行仔细勘查后发现,现场没有嫌疑人的指纹和遗留生物检材等有价值物证,但是却在受害人家房后一塑料桶中发现疑似嫌疑人所留尿液。
2 案件分析
经现场勘查人员问询家属后得知,在该案件发案前该村已有两起类似入室盗窃案件发生,入室手法相同,并且嫌疑人都在现场遗留了尿液或者尿痕,并且受害人和家属都认为没在嫌疑人遗留位置小便过。从这些情况上分析,有理由怀疑这三起案件均系同一嫌疑人所为。嫌疑人很可能因为紧张或其他习惯性原因,实施盗窃后在现场小便。
3 检验
首先,与以往的直接生理盐水浸泡尿液或尿斑、离心漂洗取沉淀物的方法不同,本次实验采用的是滤纸-漏斗过滤法提取尿液沉淀物。
3.1 准备好一个漏斗,在漏斗上方放入一对折好的滤纸,与漏斗贴合紧密。
3.2 将尿液放入烧杯中,并用适量纯水稀释、混匀。
3.3 将烧杯内的尿液导入漏斗中过滤,在漏斗底部用另外一个烧杯接过滤液。
3.4 过滤完成后,将附着有尿液残渣的滤纸取下,用剪刀剪取滤纸中间渗透较多部位适量。
之后将剪好的检材选用磁珠微量试剂盒提取:剪取的滤纸部分放入1.5ml离心管内,加入400ul裂解液,10ul蛋白霉溶液,95℃变性30min。随后取出,12000r/m离心3min,取上液转移至另一1.5ml离心管,加800ul吸附液,15ul磁珠,经翻转混匀仪吸附15min。然后将离心管置于磁力架上吸附10sec,弃全部溶液,200ul洗涤液洗涤一次,200ul 85%无水乙醇洗涤两次。室温干燥后放入25ul去离子水,65℃洗脱10min。收集最终产物经9700PCR扩增仪进行30循环扩增,试剂盒选用PowerPlex21。
4 结果
经3130XL测序仪电泳后,得到一单一男性STR分型,入全国DNA数据库经比对,比中一前科人员孙某,此盗窃案告破。
5 分析
在刑事案件中,以嫌疑人遗落在现场的尿液提取脱落细胞DNA来认定嫌疑人是否在现场出现有重要作用,由于尿液里含有尿酸,磷酸钙,磷酸镁铵(磷酸三盐)等,严重影响尿液中脱落细胞DNA的检出,那么如何从尿液中滤出脱落细胞,尽量滤掉尿酸、磷酸钙等物质便成从尿液中检出DNA峰值的关键。
同时,本案例中从现场环境和尿液中的成分分析,尿液中脱落细胞在环境的影响下,属于易降解检材,因此尿液的现场勘查和送检必须及时。随着犯罪分子作案手段以及反侦察能力的不断提高,降解生物检材在法医鉴定中具有重要的意义。但是,降解生物检材容易受到各种环境的干扰,从而给鉴定带来困难。从外部环境来看,如下几个因素对降解生物检材的降解具有重要影响。第一,温度。从化学降解的角度来分析,如果温度提高20℃,生物大分子的降解速度将会提高20倍左右。反之,如果温度降低,则会抑制生物降解速度。第二,湿度。一般而言,湿度在60%-70%,生物降解的速度适中。如果过湿,则可能加快降解速度。如果湿度不够,则会导致生物体缺少,破坏基本的生物分子结构。第三,微生物、不适宜的酸碱环境等对降解也有极强的影响。此实验中尿液中含有尿酸,很容易产生微生物,如果生物检材降解,将会导致dna片段分解,在检验中,出现STR的缺失,不利于侦破工作。 降解生物检材处理对策:首先,易降解检材的现场勘查和送检必须快速、及时、准确,最大限度地减少检材的生物降解。第二,可以适当采用其他的检验系统完成样本的判断。比如要将样本扩增到200bp存有困难,这时就不应该强调str的分性敏感,以免造成分型异常。另外,还可以考虑适当的改变部分实验条件。比如增加 taq 酶量或dna模板量,或者增加循环次数,以获得较好的效果。
从尿液中获取单一STR分型实验浅谈论文发表中易降解生物检材DNA检验的方法与趋势_论文发表
6 结语
在现阶段,dna检验技术在侦破案件中发挥着尤为重要的作用,可直接通过现场的一些微量生物检材锁定嫌疑人,“证据之王”的属性越来越明显。尤其是随着现代技术的发展,dna检验手段不断成熟和完善,dna对案件的侦破价值越来越大。尤其是随着犯罪人员反侦查意识的增强,在犯罪现场寻找传统意义的检材较为困难的背景下,dna检验的价值进一步凸显。易降解检材作为重要的证据,存在保存难、鉴定难的困境。因此,有必要在现场勘查以及送检的时效性和实验手段的创新性上继续努力,充分掌握现代技术发展趋势并加以创新,把握疑难以及易降解生物检材的检验方法和对策,从而更好的帮助案件侦破工作,对犯罪分子形成有效的震慑力,维护社会平安稳定。 参考文献: [1] 党华伟,毛炯,王惠.疑难生物检材法医 dna 检验的现状与进展. 法医学杂志,2012,28(1). [2] 童大跃,刘超.磁珠法提取DNA.新编法医物证检验技术. 2013,11(196-198). [3] 黄健,汤美云,吴孟津,江斌.5个ministr基因座遗传多态性及其在降解检材中的应用[j]. 法医学杂志,2008,24(05).
[4]李军主编.法医物证学.北京:中国人民公安大学出版社,2009.
[5]依伟力主编.法医学理论创新与实践.北京.中国人民公安大学出版社,2009.
 

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从尿液中获取单一STR分型实验浅谈论文发表中易降解生物检材DNA检验的方法与趋势
【摘  要】易降解生物检材在法医dna检验中很常见。在刑事案件中,以嫌疑人所留的微量生物检材中提取脱落细胞中DNA来认定嫌疑人是否在现场出现具有重要作用,但有时嫌疑人的特殊生物检材:如尿液,粪便等,由于易降解、酸碱度、包含杂质等原因,常规检验方法很难检出,那么如何通过创新的提取手段和方法,做出嫌疑人完整单一的STR分型就成了解决问题的关键。
本文从尿液的检验方法出发,对检材的检验现状和研究进展进行了分析,并就处理对策和注意事项进行了总结,期望为疑难易降解生物检材的鉴定工作提供有益参考。 【关键词】易降解生物检材;法医鉴定;论文发表DNA
 ABSTRACT:   Biodegradable biomaterials are very common in forensic DNA testing. In criminal cases, it is very important to extract DNA from exfoliated cells from the trace biological samples left by suspects to determine whether the suspects are present on the scene. However, sometimes the special biological samples of suspects, such as urine and feces, are difficult to be detected by conventional test methods due to their easy degradation, pH and impurities, etc The key to solve the problem is to make a complete and single STR typing of suspects.
In this paper, from the urine test methods, the current situation and research progress of the test materials were analyzed, and the treatment countermeasures and precautions were summarized. It is expected to provide useful reference for the identification of difficult and easily degradable biological samples.
KEY WORDS: biodegradable biomaterials; forensic identification; DNA
在当前dna检验中,PCR-str复合扩增技术是常用的方法。但是,随着犯罪分子作案手段的不断高明,在检材中,往往涉及面罩、绳索、混合精斑、尿液、大便等疑难生物检材。如何对这些疑难生物检材进行法医学检验,对于案件的侦破具有重要意义。从目前的法医实践来看,疑难生物检材可以分为超微量检材、降解生物检材和混合生物检材。本文从尿液这种人体体液的检材对目前的有关研究现状进行评述与总结。
从尿液中获取单一STR分型实验浅谈论文发表中易降解生物检材DNA检验的方法与趋势_论文发表
1 案件资料
2018年某月某日,吉林省四平市梨树县梨树镇某村李某家被盗,现场丢失现金和金银首饰共价值人民币2万余元。技术人员在对案发现场进行仔细勘查后发现,现场没有嫌疑人的指纹和遗留生物检材等有价值物证,但是却在受害人家房后一塑料桶中发现疑似嫌疑人所留尿液。
2 案件分析
经现场勘查人员问询家属后得知,在该案件发案前该村已有两起类似入室盗窃案件发生,入室手法相同,并且嫌疑人都在现场遗留了尿液或者尿痕,并且受害人和家属都认为没在嫌疑人遗留位置小便过。从这些情况上分析,有理由怀疑这三起案件均系同一嫌疑人所为。嫌疑人很可能因为紧张或其他习惯性原因,实施盗窃后在现场小便。
3 检验
首先,与以往的直接生理盐水浸泡尿液或尿斑、离心漂洗取沉淀物的方法不同,本次实验采用的是滤纸-漏斗过滤法提取尿液沉淀物。
3.1 准备好一个漏斗,在漏斗上方放入一对折好的滤纸,与漏斗贴合紧密。
3.2 将尿液放入烧杯中,并用适量纯水稀释、混匀。
3.3 将烧杯内的尿液导入漏斗中过滤,在漏斗底部用另外一个烧杯接过滤液。
3.4 过滤完成后,将附着有尿液残渣的滤纸取下,用剪刀剪取滤纸中间渗透较多部位适量。
之后将剪好的检材选用磁珠微量试剂盒提取:剪取的滤纸部分放入1.5ml离心管内,加入400ul裂解液,10ul蛋白霉溶液,95℃变性30min。随后取出,12000r/m离心3min,取上液转移至另一1.5ml离心管,加800ul吸附液,15ul磁珠,经翻转混匀仪吸附15min。然后将离心管置于磁力架上吸附10sec,弃全部溶液,200ul洗涤液洗涤一次,200ul 85%无水乙醇洗涤两次。室温干燥后放入25ul去离子水,65℃洗脱10min。收集最终产物经9700PCR扩增仪进行30循环扩增,试剂盒选用PowerPlex21。
4 结果
经3130XL测序仪电泳后,得到一单一男性STR分型,入全国DNA数据库经比对,比中一前科人员孙某,此盗窃案告破。
5 分析
在刑事案件中,以嫌疑人遗落在现场的尿液提取脱落细胞DNA来认定嫌疑人是否在现场出现有重要作用,由于尿液里含有尿酸,磷酸钙,磷酸镁铵(磷酸三盐)等,严重影响尿液中脱落细胞DNA的检出,那么如何从尿液中滤出脱落细胞,尽量滤掉尿酸、磷酸钙等物质便成从尿液中检出DNA峰值的关键。
同时,本案例中从现场环境和尿液中的成分分析,尿液中脱落细胞在环境的影响下,属于易降解检材,因此尿液的现场勘查和送检必须及时。随着犯罪分子作案手段以及反侦察能力的不断提高,降解生物检材在法医鉴定中具有重要的意义。但是,降解生物检材容易受到各种环境的干扰,从而给鉴定带来困难。从外部环境来看,如下几个因素对降解生物检材的降解具有重要影响。第一,温度。从化学降解的角度来分析,如果温度提高20℃,生物大分子的降解速度将会提高20倍左右。反之,如果温度降低,则会抑制生物降解速度。第二,湿度。一般而言,湿度在60%-70%,生物降解的速度适中。如果过湿,则可能加快降解速度。如果湿度不够,则会导致生物体缺少,破坏基本的生物分子结构。第三,微生物、不适宜的酸碱环境等对降解也有极强的影响。此实验中尿液中含有尿酸,很容易产生微生物,如果生物检材降解,将会导致dna片段分解,在检验中,出现STR的缺失,不利于侦破工作。 降解生物检材处理对策:首先,易降解检材的现场勘查和送检必须快速、及时、准确,最大限度地减少检材的生物降解。第二,可以适当采用其他的检验系统完成样本的判断。比如要将样本扩增到200bp存有困难,这时就不应该强调str的分性敏感,以免造成分型异常。另外,还可以考虑适当的改变部分实验条件。比如增加 taq 酶量或dna模板量,或者增加循环次数,以获得较好的效果。
从尿液中获取单一STR分型实验浅谈论文发表中易降解生物检材DNA检验的方法与趋势_论文发表
6 结语
在现阶段,dna检验技术在侦破案件中发挥着尤为重要的作用,可直接通过现场的一些微量生物检材锁定嫌疑人,“证据之王”的属性越来越明显。尤其是随着现代技术的发展,dna检验手段不断成熟和完善,dna对案件的侦破价值越来越大。尤其是随着犯罪人员反侦查意识的增强,在犯罪现场寻找传统意义的检材较为困难的背景下,dna检验的价值进一步凸显。易降解检材作为重要的证据,存在保存难、鉴定难的困境。因此,有必要在现场勘查以及送检的时效性和实验手段的创新性上继续努力,充分掌握现代技术发展趋势并加以创新,把握疑难以及易降解生物检材的检验方法和对策,从而更好的帮助案件侦破工作,对犯罪分子形成有效的震慑力,维护社会平安稳定。 参考文献: [1] 党华伟,毛炯,王惠.疑难生物检材法医 dna 检验的现状与进展. 法医学杂志,2012,28(1). [2] 童大跃,刘超.磁珠法提取DNA.新编法医物证检验技术. 2013,11(196-198). [3] 黄健,汤美云,吴孟津,江斌.5个ministr基因座遗传多态性及其在降解检材中的应用[j]. 法医学杂志,2008,24(05).
[4]李军主编.法医物证学.北京:中国人民公安大学出版社,2009.
[5]依伟力主编.法医学理论创新与实践.北京.中国人民公安大学出版社,2009.