摘要 目的：探讨新疆地区食管癌发生与肿瘤免疫因子表达调控的关系及其意义。方法：应用流式细胞术检测 60 例食管癌患者（食管癌组）和 60 例健康人（正常对照组）血清标本中 IL‐6、IL‐10、IL‐2、IL‐4、IL‐17A、TNF‐α 和IFN‐γ 等肿瘤免疫因子的表达水平。根据肿瘤分化程度、侵犯深度、淋巴结转移、是否远处转移等病理分期以及临床分期对 60 例食管癌患者进行分组，分析肿瘤免疫因子表达水平与食管癌病理、病期的关系。结果：与正常对照组相比，食管癌患者血清中细胞因子 IL‐6、IL ‐10、IL ‐2、IL ‐4、IL ‐17A 和 IFN‐γ 水平升高，差异有统计学意义（P<0.01，TNF‐α 水平变化不明显；低分化组食管癌患者血清中 IL‐10、IL‐2、IL‐4、IL‐17A 和TNF‐α 的水平上升，差异有统计学意义（P<0. 05）。当食管癌侵犯黏膜下层及肌层时，患者血清中 IL‐6 的水平降低；Ⅲ~Ⅳ期患者血清 IL‐6水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者，差异有统计学意义（P<0. 01）。结论：新疆地区食管癌患者血清中 IL‐6、IL‐10、IL‐2、IL‐4、IL‐17A、TNF‐α、IFN‐γ 的表达水平与食管癌的发生密切相关，检测其表达水平对食管癌的诊断、进展及预后有重要参考价值。
关键词：食管癌；肿瘤免疫因子；IL‐10；IFN‐γ
       食管癌（esophageal carcinoma，EC）是消化道最常见的恶性肿瘤之一，世界每年约 30 万例死于食管癌，我国食管癌在全部恶性肿瘤中发病率排第三， 死亡率排第四［1］。新疆地区是多民族聚居的地区， 特殊的饮食习惯导致食管癌发病率上升，使新疆成为我国食管癌高发区之一。
       在食管癌的发生发展过程中，机体的免疫反应及各种免疫分子发挥着重要作用，机体的免疫功能状态与肿瘤的发生发展及预后有密切关系。肿瘤微环境中浸润的巨噬细胞（tumour‐associated mac‐rophages，TAMs）受干扰素‐γ（interferon ‐ γ，IFN ‐ γ）的调控，分泌的白细胞介素（interleukin，IL）系列如IL‐1β、IL‐6、IL‐8、IL‐10、IL‐12 以及肿瘤坏死因子‐α（tumor necrosis factor‐α，TNF‐α）能通过多种形式参与微环境的调节，调控肿瘤的免疫应答［2］。近年来 众多研究报道白细胞介素系列细胞因子对肿瘤细 胞的形成和肿瘤细胞的分化起着重要的作用，并参与多种、多系统、多器官恶性肿瘤的转移过程［3］。因 此，为了进一步探讨新疆地区食管癌发病与血清肿瘤免疫因子表达水平的关系，本文采用流式细胞检测法对不同临床病理状态的 60 例食管癌患者与 60 例健康人血清中 IL‐ 6、IL ‐ 10、IL ‐ 2、IL ‐4、IL ‐ 17A、TNF‐α、IFN‐γ 的表达水平进行检测，探讨这些肿瘤免疫因子在食管癌发生、发展、预后中的价值和临床意义。
一、材料与方法
1、对象 食管癌患者血液标本取自 2012 年 9 月-2016 年 9 月新疆医科大学附属肿瘤医院确诊食管癌患者 60 例，年龄 30~67 岁，平均年龄 45 岁；所有患者经过病理证实并术前未经过化疗、放疗、或生物治疗。正常对照标本取自该医院门诊体检健康人群（n=60），年龄 32~65 岁，平均年龄 40 岁；研究对象在近半年内为未服用过免疫调节剂类药物（研究中NC 组为正常组、EC 组为食管癌组）。
2、 研究方法
（1）标本采集 所有患者于清晨空腹时，取外周血 4 mL，室温放置 2 h 后，于 4 ℃ 、3 000 r/min 离心 10 min，取上清，分装后置于-80 ℃保存。
（2）流式细胞分析  按照流式细胞术微球阵列试剂盒（CBA 试剂盒）说明书配制 7 种细胞因子微球混合液，每次实验均设立标准管和阴性对照管。在试管中分别加入 7 种混合微球液：IFN‐γ、TNF‐α、IL‐6、IL‐10、IL‐2、IL‐4、IL‐17A   及藻红蛋白（P‐phy‐coerythrin，PE）荧光染液各 50 μL，再取 50 μL 血清加入试管中，充分混匀后室温避光反应 3 h，加入 1mL 洗液，2 000 r/min，离心 5 min，弃上清加 120 μL洗液混匀 3~5 min 后上流式细胞仪（FACSCalibur， 美国BD 公司）进行数据采集，使用 BD 公司CBA 软件分析结果。
3、统计学方法 采用 SPSS 22. 0 统计学软件对数据进行分析。计量资料以±s 表示，组间比较采用 t 检验。以 P<0. 05 为差异有统计学意义。
二、结果
1、食管癌发生与肿瘤免疫因子表达水平关系与正常对照组相比，食管癌患者血清中细胞因子IL‐10、IL‐6、IL‐4、IL‐2、IL‐17A 和IFN‐γ 水平上升，差异具有统计学意义（P<0. 01），而 TNF‐α 水平变化没有统计学差异（P>0. 05）。见表 1。




表 1 食管癌组与正常对照组血清细胞因子的比较 (pg/mL)
2、食管癌患者临床病理特征与肿瘤免疫因子水平的关系
（1）、食管癌分化程度与肿瘤免疫因子水平的关系 与高分化食管癌组比较，中低分化组患者血清中 IL‐10、IL‐4、IL‐2、IL‐17A、TNF‐α 和 IFN‐γ 的水平上升，差异有统计学意义（P<0. 01），而 IL‐6 水平变化无统计学意义（P>0. 05）。见表 2。





表2 不同分化程度的食管癌患者血清中肿瘤免疫因子表达水平比较（pg/mL）
（2）食管癌侵犯程度与肿瘤免疫因子水平的关系对食管癌侵犯程度进行分类，在肿瘤侵犯到黏膜下层及肌层的患者血清中IL‑6 水平比肿瘤侵犯到外膜的患者血清中的水平低，差异具有统计学意义（P<0. 01）。IL‑10、IL‑4、IL‑2、IL‑17A、TNF‑α 和IFN ‑γ 等指标水平差异无统计学意义（P>0. 05）。见表 3。




表 3 不同侵犯程度的食管癌患者血清中肿瘤免疫因子表达水平比较（pg/mL）
（3）食管癌淋巴转移与肿瘤免疫因子水平的关系 根据肿瘤转移程度进行分析，在 60 例食管癌患者中 36 例有淋巴结转移，24 例无淋巴结转移。并对两组进行比较，发现上述肿瘤免疫因子变化水平差异均无统计学意义（P>0. 05）。见表 4。




表 4 是否淋巴结转移的食管癌患者血清中肿瘤免疫因子表达水平比较（pg/mL）
（4）食管癌临床分期与肿瘤免疫因子水平的关系 对食管癌患者进行临床分期，将 60 例食管癌标本分为Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期两组，各组中分别有 29 例和 31 例标本。在两组之间进行比较时，在Ⅲ ~Ⅳ期时IL‐6 的表达水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期，差异具有统计学意义（P<0. 01）。IL‐10、IL‐4、IL‐2、IL‐17A、TNF ‐ α 和 IFN ‐ γ 等指标水平无统计学意 义（P>0. 05）。见表 5。



表 5 不同临床分期的食管癌患者血清中肿瘤免疫因子表达水平比较（pg/mL）
三、讨 论
       食管癌的发展过程是一个复杂过程。本研究采用流式细胞技术对新疆地区食管癌患者血清中IL‐10、IL‐6、IL‐4、IL‐2、IL‐17A、TNF‐α 和IFN‐γ 等肿瘤免疫因子的表达水平进行分析。在食管癌发生方面，食管癌患者 IL‐10、IL‐6、IL‐4、IL‐2、IL‐17A 和 IFN‐γ 等肿瘤免疫因子水平比健康人的水平升高，上述免疫因子可能在食管癌的发生中起重要的作用 ；在 肿瘤病理特征方面 ，IL ‐ 10、IL ‐ 4、IL ‐ 2、IL‐17A、TNF‐α 和IFN‐γ 在中低分化食管癌中水平上升，可能与肿瘤的恶性程度有关；IL ‐6 在肿瘤侵犯到黏膜下层及肌层的患者中水平降低，在Ⅲ ~Ⅳ 期的患者中含量上升，可能与肿瘤侵犯、转移、发展程度有关。
       TNF‐α 可促进肿瘤细胞的程序性凋亡[4]。研究表明血清TNF‐α、VEGF 水平随着甲状腺癌临床分期的加重而升高，其水平与分化型甲状腺癌的发生、发展和侵袭转移密切相关[5]。而我们的实验结果提示中低分化食管癌患者血清中 TNF‐α 水平高于高分化组，与上述内容不完全相同，可能与区域性和多态性有关。
        IL‐6 的高表达和异常的信号通路可促进肿瘤的发生和发展，并与多种恶性肿瘤患者预后差呈正相关［6］。在本研究中，与对照组相比，食管癌患者血清中IL‐6 水平未改变，随着肿瘤侵袭程度和分期的增加，IL‐6 水平增高。Ⅲ~Ⅳ期患者血清IL‐6 水平高于Ⅰ ~ Ⅱ 期患者，提示 IL‐ 6 参与宿主的免疫反应，随着肿瘤的恶化，其促癌作用大于抑癌作用。
        Th17 主要分泌IL‐17A、IL‐17F 等细胞因子，有研究认为 IL‐17A 在肿瘤发展中起双向作用[7］。本研究中 IL‐17A 表达水平降低，尚不能支持 IL‐17A 具有促瘤或抑瘤作用，需进一步研究肿瘤微环境中IL‐17A 同各种细胞和趋化因子的协同作用。IL‐10 生物学作用具有多面性，本研究中 IL‐10 在食管癌患者血清中异常高表达，低分化组血清中 IL‐10 的水平高于高分化组，结果与文献报道基本一致。
        IFN‐γ 可抑制肿瘤细胞的增殖与分化[8]。IL‐4可促进B 细胞的增殖和分化[9]。IL‐2 在机体抗感染及抗肿瘤免疫中具有重要作用[10]。本研究中食管癌患者血清中IFN‐γ、IL‐4 和IL‐2 水平异常升高，结果与文献报道基本一致。
       新疆地区食管癌发病率上升与环境、饮食习惯等多种因素有关，同时食管癌患者血清中 IL‐10、IL‐6、IL‐4、IL‐2、IL‐17A、TNF‐α 和 IFN‐γ 等肿瘤免疫因子水平的上升或降低可能在其发生、转移及发展过程中发挥关键作用，对新疆地区食管癌的早期预警、治疗和预后评估均具有重要的临床价值。
参考文献：
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